ⅠNнуклеин қышқылыiкіріспе
Нуклеин қышқылы дезоксирибонуклеин қышқылы (ДНҚ) және рибонуклеин қышқылы (РНҚ) болып бөлінеді, олардың ішінде РНҚ рибосомалық РНҚ(рРНҚ), хабаршы РНҚ(мРНҚ) және трансферттік РНҚ(тРНҚ) әр түрлі қызметтеріне қарай бөлінеді.ДНҚ негізінен ядрода, митохондрияда және хлороформда шоғырланса, РНҚ негізінен цитоплазмада таралады.Ген экспрессиясының материалдық негізі ретінде нуклеин қышқылының экстракциясы молекулалық биологияны зерттеуде және клиникалық молекулалық диагностикада өте маңызды рөл атқарады.Нуклеин қышқылы экстракциясының концентрациясы мен тазалығы кейінгі ПТР, секвенирлеу, вектор құрылысы, ферментті қорыту және басқа тәжірибелерге тікелей әсер етеді.
Ⅱ Нуклеин қышқылын алу және тазарту әдісі
① Фенол/хлороформды экстракциялау әдісі
Фенол/хлороформ экстракциясы ДНҚ экстракциясының классикалық әдісі болып табылады, ол негізінен үлгілерді өңдеу үшін екі түрлі органикалық еріткіштерді пайдаланады, су фазасында ДНҚ негізіндегі нуклеин қышқылын, органикалық фазадағы липидтерді және екі фаза арасындағы ақуыздарды ерітеді.Бұл әдістің артықшылығы төмен баға, жоғары тазалық және жақсы әсер етеді.Кемшіліктері - күрделі жұмыс және ұзақ уақыт.
② Тризол әдісі
Тризол әдісі - РНҚ экстракциясының классикалық әдісі.Тризол әдісі хлороформмен центрифугалаудан кейін сулы фаза және органикалық фаза болып екіге бөлінеді, онда РНҚ сулы фазада ерітіледі, сулы фаза жаңа ЭП түтігіне ауыстырылады, изопропанолды қосқаннан кейін преципитация алынады, содан кейін этанолды тазартады.Бұл әдіс жануарлардың ұлпаларынан, жасушаларынан және бактерияларынан РНҚ алу үшін қолайлы.
③ Центрифугалық бағанды тазарту әдісі
Центрифугалық бағанды тазарту әдісі арнайы кремний матрицалық адсорбциялық материалдар арқылы ДНҚ-ны адсорбциялай алады, ал РНҚ және ақуыз біркелкі өтуі мүмкін, содан кейін нуклеин қышқылын бөлу және тазарту үшін нуклеин қышқылын біріктіру үшін жоғары тұзды төмен PH, төмен тұзды жоғары PH мәні элюциясын пайдаланыңыз.Артықшылықтары жоғары тазарту концентрациясы, жоғары тұрақтылық, органикалық еріткіштің қажеті жоқ және төмен құны болып табылады.Кемшілігі - оны кезең-кезеңмен центрифугалау қажет, одан да көп операциялық қадамдар.
④ Магниттік моншақтар әдісі
Магниттік моншақтар әдісі - жасуша тінінің үлгісін лизат арқылы бөлу, үлгідегі нуклеин қышқылын босату, содан кейін нуклеин қышқылының молекулалары магниттік моншақ бетінде арнайы адсорбцияланады, ал ақуыздар мен қанттар сияқты қоспалар қалады. сұйықтық.Жасуша тінінің бөлінуі, нуклеин қышқылымен магниттік түйіршіктердің байланысуы, нуклеин қышқылымен жуу, нуклеин қышқылының элюциясы және т.б. кезеңдері арқылы ақырында таза нуклеин қышқылы алынады.Артықшылықтары қарапайым жұмыс және қадамдық центрифугалауды қажет етпейтін қысқа уақытты пайдалану болып табылады.Оның техникалық талаптары төмен және автоматты және жаппай жұмысты жүзеге асыра алады.Магниттік моншақ пен нуклеин қышқылының ерекше комбинациясы экстракцияланған нуклеин қышқылын жоғары концентрация мен тазалықпен қамтамасыз етеді.Кемшілігі – қазіргі нарықтағы баға салыстырмалы түрде қымбат.
⑤ Басқа әдістер
Жоғарыда аталған төрт әдіске қосымша қайнау крекинг, концентрлі тұз әдісі, анионды жуғыш әдіс, ультрадыбыстық әдіс және ферментативті әдіс және т.б.
Ⅲ Нуклеин қышқылын алу түрі
Foregene әлемдегі жетекші тікелей ПТР платформасына, қос бағаналы РНҚ оқшаулау платформасына (тек ДНҚ + тек РНҚ) ие.Негізгі өнімдерге ДНҚ/РНҚ оқшаулау жинақтары, ПТР және Тікелей ПТР реагенттері молекулалық зертханалық реагенттер сериялары кіреді.
① Жалпы РНҚ экстракциясы
Жалпы РНҚ экстракция үлгілеріне қан, жасушалар, жануарлар тіндері, өсімдіктер, вирустар және т.б. кіреді. Жалпы РНҚ-ның жоғары тазалығы мен жоғары концентрациясын жалпы РНҚ экстракциясы арқылы алуға болады, оны RT-ПТР, чипті талдау, in vitro трансляциясында, молекулалық клондау, Dot Blot және басқа эксперименттер.
Шетелдікпен байланыстыРНҚ оқшаулау жинақтары
Жануарлардың жалпы РНҚ оқшаулау жинағы--Жануарлардың әртүрлі ұлпаларынан жоғары таза және жоғары сапалы жалпы РНҚ-ны жылдам және тиімді түрде алыңыз.
Жасушаның жалпы РНҚ оқшаулау жинағы--Әртүрлі өсірілген жасушалардан 11 минут ішінде жоғары тазартылған және сапалы жалпы РНҚ алуға болады.
Өсімдіктің жалпы РНҚ оқшаулау жинағы--Полисахарид пен полифенол мөлшері төмен өсімдік үлгілерінен жоғары сапалы жалпы РНҚ-ны жылдам шығарып алыңыз.
Вирустық РНҚ оқшаулау жинағы--Плазма, сарысу, жасушасыз дене сұйықтықтары және жасуша культурасының супернатанттары сияқты үлгілерден вирустық РНҚ-ны жылдам оқшаулаңыз және тазартыңыз.
② Геномдық ДНҚ экстракциясы
ДНҚ-ның геномдық экстракция үлгілеріне топырақ, нәжіс, қан, жасушалар, жануарлар тіндері, өсімдіктер, вирустар және т.б. жатады. Геномдық ДНҚ экстракциясы ферменттерді қорытуда, ДНҚ кітапханасын құруда, ПТР, антиденелерді дайындауда, Western Blot будандастыру талдауында, гендік чип, жоғары -өткізу секвенциясы және басқа эксперименттер.
Шетелдікпен байланыстыДНҚ оқшаулау жинақтары
Жануарлар тінінің ДНҚ оқшаулау жинағы--Жануарлардың ұлпалары, жасушалары және т.б. сияқты көптеген көздерден геномдық ДНҚ-ны жылдам алу және тазарту.
Қан ДНҚ Миди жинағы (1-5 мл)--Антикоагулянды қаннан (1-5мл) жоғары сапалы геномдық ДНҚ-ны жылдам тазартыңыз.
Төменгі жағынды/FTA картасының ДНҚ оқшаулау жинағы--Жақпақ жағынды/FTA картасы үлгілерінен жоғары сапалы геномдық ДНҚ-ны жылдам тазартыңыз.
Өсімдік ДНҚ оқшаулау жинағы--Өсімдік үлгілерінен (оның ішінде полисахаридтер мен полифенол өсімдіктер үлгілерінен) жоғары сапалы геномдық ДНҚ-ны жылдам тазарту және алу
③ Плазмидті экстракциялау
Плазмида - бұл ДНҚ рекомбинациясының жалпы тасымалдаушысы болып табылатын жасушалардағы дөңгелек шағын молекулалы ДНҚ түрі.Плазмидті экстракциялау әдісі - РНҚ-ны жою, плазмидті бактериялық геномдық ДНҚ-дан бөлу және салыстырмалы түрде таза плазмидті алу үшін ақуызды және басқа қоспаларды жою.
Жалпы плазмидті шағын жинақ--Трансформация және ферментті қорыту сияқты әдеттегі молекулалық биология эксперименттері үшін трансформацияланған бактериялардан жоғары сапалы плазмидтік ДНҚ-ны жылдам тазартыңыз
④ Басқа экстракция түрлері, miRNA экстракциясы және т.б.
Жануарлардың miRNA оқшаулау жинағы-- Жануарлардың әртүрлі ұлпалары мен жасушаларынан 20-200 нт миРНҚ, сиРНҚ, снРНҚ шағын РНҚ фрагменттерін жылдам және тиімді бөліп алу
Ⅳ Нуклеин қышқылын алу және тазарту нәтижесіне қойылатын талаптарs
① Нуклеин қышқылының біріншілік құрылымының тұтастығын қамтамасыз ету.
② Белоктардың, қанттардың, липидтердің және басқа макромолекулалардың интерференциясын азайтыңыз
③ Нуклеин қышқылы үлгілерінде ферментті тежейтін органикалық еріткіш немесе металл иондарының жоғары концентрациясы болмауы керек.
④ ДНҚ экстракциясы кезінде РНҚ және басқа нуклеин қышқылының ластануын жою керек және керісінше.
Жіберу уақыты: 24 қараша 2022 ж
